延胡索为罂粟科植物延胡索的干燥块茎，具有活血止痛、行气的功效，主要用于治疗胸痹心痛、脘腹疼痛等疾病，处方中常用醋制。延胡索药材在干燥和运输过程中易于产生霉变，霉菌容易产生真菌毒素，主要代表是黄曲霉毒素，黄曲霉毒素是一类化学结构相似的二氢呋喃香豆素的衍生物，主要包括黄曲霉毒素B1（AFB1）、黄曲霉毒素B2（AFB2）、黄曲霉毒素G1（AFG1）、黄曲霉毒素G2（AFG2）及其代谢产物黄曲霉毒素M1 和黄曲霉毒素M2。广州中医药大学第一附属医院谭丽盈以70% 甲醇溶液为提取剂，采用Waters BEH C18 （2.1 mm×100 mm，1.7 μm）色谱柱分离，建立了超高效液相色谱– 串联质谱（UPLC–MS／MS）法同时测定醋延胡索药材中AFB1、AFB2、AFG1、AFG2 含量的方法。

主要仪器与试剂

    超高效液相色谱仪– 三重四级杆质谱仪：Waters H-class XEVO TQD 型，MassLynx V4.1 工作站，美国waters 公司。

    电子分析天平：Sartorius BT124S 型，感量为0.1 mg，北京赛多利斯仪器有限公司。

    超声波清洗器：KQ–700VDB 型，昆山市超声仪器有限公司。

    免疫亲和柱：Pribo Fast IAC，青岛普瑞邦生物科技有限公司。

    低速台式离心机：An Ke TDL–60B 型，上海安亭科学仪器厂。

    超纯水机：Milli-Q Reference型，美国默克公司。

    氮气发生器：Genius-NM32LA 型，英国匹克科技公司。

    黄曲霉毒素混合标准品溶液：AFB1、AFB2、AFG1、AFG2 质量浓度分别为1.04、0.35、1.18、0.59 μg／mL，批号为610001–201301，中国食品药品检定研究院。

    AFB1 质控样品：编号为CFAPA–QC522B–1，参考值为（2.95±0.88） μg／kg，大连中食国实检测技术有限公司。

    AFB2 质控样品：编号为CFAPA–QC522B–2，参考值为（1.96±0.67） μg／kg，大连中食国实检测技术有限公司。

    AFG1 质控样品：编号为CFAPA–QC522B–3，参考值为（2.35±0.71） μg／kg，大连中食国实检测技术有限公司。

    AFG2 质控样品：编号为CFAPA–CFAPA–QC522B–4，参考值为（2.13±0.80） μg／kg，大连中食国实检测技术有限公司。

    玻璃纤维滤纸：青岛普瑞邦公司。

    氯化钠：分析纯，上海国药化学试剂公司。

    甲醇：色谱纯，美国赛默飞世尔科技有限公司。

    实验用水为超纯水。

    其它试剂均为分析纯。

    醋延胡索样品：共10 批，均为罂粟科植物延胡索（Corydalis yanhusuo W.T.Wang）的干燥块茎，且均为醋制品，基本信息见表1。

仪器工作条件

1　色谱

    色谱柱：Waters BEH C18 柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm，美国沃特世公司）；流动相：甲醇（A）–10 mmol 醋酸铵溶液（B）；梯度洗脱程序：初始B 的体积分数为36%，0～5 min 时，B 由36% 逐渐增加至85%，5～6.5 min 时，B 由85% 逐渐增加至100%，6.5～6.6 min 时，B为36% ；流量：0.3 mL／min ；柱温：40 ℃；进样体积：2 μL。

2　质谱

    离子源：电喷雾离子源（ESI）；扫描模式：正离子模式采集；检测方式：MRM（多反应监测）方式；毛细管电压：0.5 kV ；锥孔电压：55 V ；离子源温度：150 ℃；去溶剂气：氮气，流量为950 L／h，温度为450 ℃。4 种黄曲霉毒素的质谱参数见表2。

测定结果

    当进样体积为2 μL 时，黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2 的质量分别在0.42～20.80、0.14～7.00、0.47～23.69 和0.24～11.80 pg 范围内与定量离子的色谱峰面积线性关系良好，相关系数分别为0.999 4、0.999 0、0.998 9 和0.998 5，检出限分别为0.003、0.005、0.018、0.017 μg／kg。高、中、低3 个加标浓度水平下，4 种黄曲霉毒素的平均回收率分别为88.94%、76.82%、104.90% 和93.22%，测定结果的相对标准偏差分别为6.61%、3.71%、2.25% 和4.18%（n=6）。