2015年4月22日，台湾地区“卫生福利部”发布部授食字第1041900545号公告，制定“婴儿谷物类辅助食品中黄曲毒素B1之检验方法（MOHWT0017.00）”，并自即日生效。同日，部授食字第1041900539号公告废止“食品中黄曲毒素之检验方法－液状乳中黄曲毒素M1及M2之检验”。

婴儿谷物类辅助食品中黄曲毒素B1之检验方法

1 . 适用范围：本检验方法适用于婴儿谷物类辅助食品中黄曲毒素B1之检验。

2 . 检验方法：检体经萃取及净化后，以高效液相层析仪（high performance liquid chromatograph, HPLC）分析之方法。

2.1. 装置：

2.1.1. 高效液相层析仪：

2.1.1.1. 检出器：荧光检出器（Fluorescence detector）。

2.1.1.2. 层析管：Cosmosil 5C18-AR，5 µm，内径4.6 mm×25 cm，或同级品。

2.1.1.3. 光化学反应器：Knitted Reactor Coils (KRC) 25-25，或同级品。

2.1.2. 均质机（Homogenizer）：可达15000 rpm以上并适用有机溶剂者。

2.1.3. 粉碎机（Grinder）。

2.1.4. 氮气蒸发装置（Nitrogen evaporator）。

2.2. 试药：氯化钠采用试药特级；甲醇采用液相层析级；去离子水（比电阻于25℃可达18 MΩ．cm以上）；黄曲毒素B1对照用标准品。

2.3. 器具及材料：

2.3.1. 离心管：50 mL，PP材质。

2.3.2. 容量瓶：1 mL及10 mL，褐色。

2.3.3. 滤膜：孔径0.22 μm，Nylon材质。

2.3.4. 滤纸：Whatman No.1，直径11 cm，或同级品。

2.3.5. 玻璃纤维滤纸（Glass microfibre filters）：直径9 cm。

2.3.6. 塑料针筒：1 mL及10 mL。

2.3.7. 免疫亲和性管柱（Immunoaffinity column）：采用内含对黄曲毒素B1、B2、G1及G2具专一性单株抗体之AflaTest-P管柱，或同级品。

2.3.8. 针筒过滤器（Syringe filter）：滤膜孔径0.22 μm，PTFE材质。

2.4. 试剂之调制：

2.4.1. 50%甲醇溶液

      　　取甲醇与去离子水以50：50（v/v）之比例混匀。

2.4.2. 80%甲醇溶液

      　　取甲醇与去离子水以80：20（v/v）之比例混匀。

2.5. 移动相溶液之调制：

    　　取甲醇与去离子水以45：55（v/v）之比例混匀后，经滤膜过滤，取滤液供作移动相溶液。

2.6. 标准溶液之配制：

     　　精确量取黄曲毒素B1对照用标准品约1 mg，精确称定，以甲醇稀释并定容至10 mL，作为标准原液。临用时取适量标准原液，以50%甲醇溶液稀释至0.05～25 ng/mL，供作标准溶液。

2.7. 检液之调制：

      　　将检体磨碎混匀后，取约25 g，精确称定，置于均质机中，加入氯化钠5 g及80%甲醇溶液125 mL，以15000 rpm均质2分钟，经滤纸过滤。精确量取滤液10 mL，加去离子水40 mL混匀，以玻璃纤维滤纸过滤。精确量取滤液25 mL，注入免疫亲和管柱（流速控制1滴／秒），待滤液完全通过管柱后，以去离子水10 mL流洗2次（流速控制1滴／秒），弃流出液，再以甲醇1 mL冲提（流速控制1滴／秒），收集冲提液，于40℃水浴中以氮气浓缩至干，再以50%甲醇溶液定容至1 mL，经针筒过滤器过滤，供作检液。

2.8. 鉴别试验及含量测定：

     　　精确量取检液及标准溶液各50 μL，分别注入高效液相层析仪中，依下列条件进行液相层析，就检液与标准溶液所得波峰之滞留时间比较鉴别之，并依下列计算式求出检体中黄曲毒素B1之含量（ppb）：

    　　　　检体中黄曲毒素B1含量（ppb）=

    　　C：由标准曲线求得检液中黄曲毒素B1之浓度（ng/mL）

    　　V：检体最后定容之体积（mL）

    　　F：稀释倍数（25）

    　　M：取样分析检体之重量（g）

    　　高效液相层析测定条件：

    　　　　层析管柱：Cosmosil 5C18-AR，5 µm，内径4.6 mm×25 cm。

    　　　　光化学反应器：KRC 25-25。

    　　　　荧光检出器：激发波长360 nm，发射波长440 nm。

    　　　　移动相溶液：依2.5.节所调制之溶液。

    　　　　移动相流速：1.0 mL/min。

附注：1.   本检验方法之定量极限为0.05 ppb。

　　　2.   检体中有影响检验结果之物质时，应自行探讨。

　　　3.   以液相层析串联质谱仪（LC/MS/MS）进行确认时，其LC/MS/MS之多重反应侦测（multiple reaction monitoring, MRM）模式參考參數如下表

分析物

离子化模式

离子对

去集簇电压

（V）

碰撞能量

（eV）

前驱離子（m/z）＞

产物離子（m/z）

黄曲毒素B1

ESI+

313＞241*

313＞285

48

48

36

22

　　　　*定量离子对

　　　　注：上述参数不适时，依所使用之仪器，设定适合之参数。

参考文献：

AOAC. 2004. Aflatoxin B1 in baby foods. AOAC Official Method 2000. 16.

厦门WTO工作站编

2015.4.23