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嘉峪检测网 2018-01-17 15:41
赭曲霉毒素A 广泛分布于自然界，人类摄入赭曲霉毒素A 主要来自谷物，其次是葡萄酒和咖啡等，其具有很强的肝脏毒性和肾脏毒性，并有致畸、致突变和致癌作用。2005 年欧盟规定葡萄酒、以及用于饮料制作的葡萄酒或者葡萄，限量为2.0μg/kg。GB 2761-2017《食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》规定葡萄酒中赭曲霉毒素A 限量标准为2.0μg/kg；咖啡豆和咖啡粉中赭曲霉毒素A 限量标准为5.0μg/kg，速溶咖啡中赭曲霉毒素A 限量标准为10.0μg/kg。
根据国标GB5009.96-2016 第二法，使用CNW Poly-Sery MAX 混合型阴离子交换SPE 小柱利用高效液相- 荧光的方法检测出红酒和咖啡粉中赫曲霉毒素A，方法简单易行，为赭曲霉毒素A 的检测提供了复杂基质的解决方案同时也是除免疫亲和柱外的SPE 小柱法。
一、样品前处理
1、红酒基质空白：实验前将待测红酒先置于4℃冰箱冷藏30min，过滤或超声脱气后再使用。称取10g 预处理后的红酒，加入6mL 的提取液( 氢氧化钾溶液0.1mol/L- 甲醇- 水(2+60+38)，混匀，再用氢氧化钾溶液（0.1M）调pH 至10.0，进行固相萃取净化
红酒加标：在10g 预处理后的红酒中加入赭曲霉毒素A 标准溶液（使上机检测浓度为5 ppb），其它操作同红酒空白。
2、咖啡粉基质空白：称取2.5g 咖啡粉，加入25 mL 的提取液[ 甲醇- 碳酸氢钠溶液30g/L(50+50) ]，于漩涡振荡器上振荡提取3~5min，4000r/min 离心10min 滤纸过滤，取滤液10mL 进行固相萃取净化。
咖啡粉加标：在样品中加入赭曲霉素A 标准溶液（使上机检测浓度为5 ppb），其它操作同样品空白。
二、小柱操作
小柱：CNW Poly-Sery MAX 混合型阴离子交换SPE 小柱（SBEQ-CA3385；200mg/6mL）
活化：5mL 甲醇
平衡：3mL 提取液
（氢氧化钾溶液（0.1 mol/L）+ 甲醇+ 水=2+60+38）
上样：红酒基质全部上样、咖啡基质10ml 上样
淋洗：分别用3mL 淋洗液{ 氢氧化钾溶液（0.1mol/L）- 乙腈- 水（3+50+47）}、3mL 水、3mL 甲醇淋洗小柱，抽干
洗脱：用5mL 洗脱液( 甲醇- 乙腈- 甲酸- 水{40+50+5+5）} 洗脱，收集洗脱液，45℃氮气吹干，加1ml 流动相复溶，过滤后，待上机分析。
三、HPLC-FLD 测定条件
色谱柱：CNW Athena C18-wp
（LAEQ-462572； 4.6mm*250mm, 5um）
流动相：A：冰乙酸- 水（2+100） B：乙腈
红酒基质A:B(50:50)，咖啡基质A:B(52:48)
流速：1.0mL/min；
激发波长：333nm; 发射波长：460nm；
柱温：30℃
进样：20uL
四、实验谱图
图1：赭曲霉毒素A 5ppb 标准谱图
图2：红酒基质空白谱图
图3：红酒基质加标5 ppb 谱图
图4：咖啡基质空白谱图
图5：咖啡基质加标5 ppb 谱图
五、实验数据
来源：安谱
