三聚氰酸又称“氰尿酸”，是一种广泛的化工原料，用于生产树脂、涂料等化工产品。近年来，三聚氰酸被非法添加到食品或饲料中以虚假提高蛋白质的含量，人或动物长期食用含三聚氰酸的食品，会造成肾组织损伤、泌尿系结石等严重危害，因此其毒性作用引起了人们的广泛关注。

适用于牛奶、奶粉中三聚氰酸的检测。

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

高效液相色谱仪，紫外检测器，SPE固相萃取装置，真空旋转蒸发器，超声仪，涡旋振荡仪，离心机。

试剂材料

市售浓缩牛奶；三聚氰酸标品；Ⅰ级蒸馏水；甲醇、乙腈（均为色谱纯）；甲酸、氨水、四丁基溴化铵、磷酸氢二钠（均为分析纯）。

      色谱柱：ZKAT-C18（5 μm，120 Å，4.6×250 mm，订货号：152200542）

SPE柱：AE.SPE-MAX（500 mg/6 mL）

样品提取

将5 mL液态奶与5 mL乙腈混合，剧烈振荡2 min，4000 rpm下离心5 min，取2 mL上清液与2 mL 5%氨水水溶液混合，混合液待净化。

PE柱净化

（1）活化：MAX固相萃取柱使用前依次用5 mL甲醇活化、5 mL 5%氨水水溶液平衡。

（2）上样：将待净化液加入已活化好的固相萃取柱中，以1 mL/min的流速过柱，弃去滤液。

（3）淋洗：依次加入5 mL 5%氨水水溶液、5 mL甲醇淋洗，淋洗液弃去。

（4）洗脱：用5 mL 2%甲酸甲醇洗脱，收集洗脱液。

（5）重新溶解：洗脱液减压蒸馏至近干，用流动相溶解并定容至1 mL，0.45 μm微孔滤膜过滤，供HPLC测定。

色 谱 柱：ZKAT-C18（5 μm，120 Å，4.6×250 mm，订货号：152200542）

检 测 器：UV2996 紫外/可见光检测器

检测波长：UV 226 nm 

流 动 相：缓冲溶液*/甲醇 = 92/8（v/v）          

流    速：1.0 mL/min

柱    温：30 ℃                   

进 样 量：20 μL

*缓冲溶液：0.005 mol/L四丁基溴化铵 + 0.005 mol/L磷酸氢二钠水溶液，用水定容至1 L。

采用此方法进行奶制品中三聚氰酸含量的液相测试，添加回收率达到97.19%，表明AE.SPE-MAX 及ZKAT-C18适于乳制品中三聚氰酸的纯化和测试。