医美填充产品主流材料功效的细胞模型验证概述

1、细胞毒性验证

以HaCaT(人永生化角质形成细胞)为受试细胞，采用ISO 10993-GB/T 16886标准制备材料浸提液，加入材料浸提液培养，采用CCK-8法检测细胞存活率。

2、保湿性能验证

以HaCaT(人永生化角质形成细胞)是一种人皮肤表皮角质形成细胞，有一定分化能力，在体外培养条件下能够模拟皮肤表皮的组织结构，其主要功能是参与皮肤屏障的构建和修复。以HaCaT细胞为受试细胞，采用安全浓度下材料浸提液（或材料本身）进行干预处理，设置空白对照组。采用WB及PCR技术检测水通道蛋白AQP3表达水平变化。

3、抗炎活性验证

RAW264.7（小鼠单核巨噬细胞细胞）细胞是炎症研究最常用的，以RAW264.7细胞为受试细胞，加入LPS诱导验证模型，采用安全浓度下材料浸提液（或材料本身）进行干预处理，设置空白对照组、模型对照组。通过ELISA法检测细胞上清IL-6、TNF-α等炎症因子的表达水平，采用流式细胞术或免疫荧光检测M1/M2巨噬细胞极化比例。

4、美白功效验证

以小鼠黑色素瘤B16细胞或人表皮黑色素瘤A375细胞为受试细胞，该类细胞培养要求低，生长快，且具有黑色素形成能力，成为美白功效验证的首选细胞。黑色素诱导生成的方式包括物理刺激法和化学诱导法，其中物理刺激法采用UVB辐照（实验室证明100mJ/cm2以下剂量对细胞活性无明显影响，常选择50mJ/cm2）3d诱导黑色素生成；化学诱导法采用α-黑色素细胞刺激激素（α-MSH）培养48-72h诱导黑色素生成。采用安全浓度下材料浸提液（或材料本身）进行干预处理，设置空白对照组、模型对照组。通过L-DOPA法检测酪氨酸酶活性、NaOH溶解法检测细胞黑素含量、WB及PCR检测黑色素形成相关蛋白表达水平。

5、胶原再生验证

人真皮成纤维细胞（hDFs）是结缔组织的主要细胞成分，能合成和分泌大量的型胶原和基质成分，符合胶原再生能力验证的实验需求。将受试刺激性材料与人真皮成纤维细胞共培养，设置空白对照组。采用免疫荧光或WB检测羟脯氨酸含量、Col1A1、Col3A1表达。

6、抗衰效果验证

采用人真皮成纤维细胞（hDFs）为受试细胞，采用光刺激或H2O2诱导光老化或氧化衰老细胞模型。采用安全浓度下材料浸提液（或材料本身）进行干预处理，设置空白对照组、模型对照组。采用CCK-8法检测细胞活力变化，采用生化试剂盒或流式细胞术检测ROS等氧化应激指标表达水平，采用SA-β-gal染色检测衰老表型变化，采用WB检测自噬蛋白活性。