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嘉峪检测网 2016-12-27 00:19
一、 前言
三聚氰胺，俗称密胺、蛋白精，是一种重要的化工原料，没有任何营养价值，是国家禁止在食品或饲料中使用的添加物，但因其含氮量高达66%，被一些造假者利用，添加在饲料或食品中，造成蛋白质含量高的假象，以获得更高利润，如果蛋鸡长期食用含有三聚氰胺的饲料，会导致鸡蛋中残留三聚氰胺。研究表明，三聚氰胺会造成生殖、泌尿系统的损害，膀胱以及肾部的结石，并可进一步诱发膀胱癌。
表1 三聚氰胺样品信息
二、适用范围
适用于巧克力中三聚氰胺的检测。
三、实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
高效液相色谱仪，紫外检测器，SPE固相萃取装置，涡旋振荡仪，氮气吹干仪，真空泵，高速离心机，电子天平。
试剂材料
市售巧克力，三聚氰胺标品，乙腈（色谱纯），甲酸、氨水、甲醇、庚烷磺酸钠、柠檬酸（均为分析纯）。
色谱柱：ATEO-C18（5 μm，120 Å，4.6×250 mm，订货号：152200542）
SPE柱：AE.SPE-MCX（60 mg/3 mL）
四、样品制备
1、 样品提取
取5 g粉碎巧克力样品，加入20 mL 50%乙腈水溶液混合，涡旋振荡10 min，6000 r/min 离心5 min，取上清液待净化。
2、 SPE柱净化
（1）活化：分别用3 mL甲醇、3 mL 4%甲酸水活化固相萃取柱。
（2）上样：将提取液加入小柱中，以≦1 mL/min的流速过柱，弃去滤液。
（3）淋洗：依次用3 mL水、3 mL甲醇淋洗，淋洗液弃去。
（4）洗脱：用3 mL 5%氨水甲醇溶液洗脱，收集洗脱液。
（5）重新溶解：50℃下氮吹吹干后，用20% 甲醇水溶液溶解并定容至1 mL，0.45μm滤膜过滤，供HPLC检测。
五、添加回收结果
巧克力基质中三聚氰胺添加水平（2 mg/kg）的回收结果
表2 巧克力基质中三聚氰胺添加水平（2 mg/kg）的回收结果
图1 三聚氰胺标准品液相色谱图
图2 巧克力中三聚氰胺检测（空白样品）液相色谱图
图3 添加水平为2 mg/kg巧克力中三聚氰胺检测的液相色谱图
液相色谱条件
色 谱 柱：ATEO-C18（250 * 4.6 mm，5 μm）
检 测 器：UV2996型紫外/可见光检测器
检测波长：UV 240 nm
流 动 相：缓冲溶液*/乙腈 = 92/8（v/v）
流 速：1.0 mL/min
柱 温：30 ℃
进 样 量：20 μL
*缓冲溶液：分别称取2.02 g庚烷磺酸钠、2.10 g柠檬酸钠，用水定容至1 L。
六、结论
采用上述方法进行固相萃取和高效液相色谱检测巧克力中的三聚氰胺，添加回收率达92.27%，表明使用AE.SPE-MCX固相萃取柱及ATEO-C18柱，可快速可靠地检测巧克力中的三聚氰胺。
来源：色谱早知道
