体外细胞毒性试验涉及的有关标准

依据医疗器械的生物学评价 第5部分：体外细胞毒性试验

ISO 10993.5-2009（国际标准）

GB/T 16886.5-2017（国家标准，等同于ISO 10993.5-2009）

EN ISO 10993.5-2009(欧洲标准)

GB/T 14233.2-2005（国家标准，针对医用输血、输液和注射用器具）

ISO 7405-2008 （针对牙科）

ASTM F 895-2016（美国材料协会，琼脂法）

评价细胞活性的方法

 细胞毒性试验的关键点

样品和对照品制备

材料浸提液制备

琼脂、直接接触试验材料的制备

对照品制备：阳性对照材料、阴性材料对照、空白

浸提介质

含10%胎牛血清培养基（非极性）：浸提非极性物质和极性物质

无血清培养基（极性）：浸提极性物质

浸提比例

浸提比例可按照样品表面积或质量选择；

如适用，推荐选用表面积；

使用重量浸提，仅适用于客观上无法获得表面积，例如半固体、粉末、颗粒、海绵等；

表面积须包括能接触到浸提液的所有表面，如内侧＋外侧、正面＋反面。

浸提温度和时间

细胞毒性实验中采用的温度和时间为（37±1）℃、（24±2）h，可采用其他条件（如在37℃时延长或缩短浸提时间）来模拟临床使用中的浸提或提供潜在危害的适当测定。

对于短期接触完好皮肤或黏膜的非植入类医疗器械，浸提时间可少于24h，但不少于4h。

高于（37±1）℃的浸提温度可能会影响化学稳定性/或培养基中血清和其他成分的稳定性。

短期接触（﹤24h）推荐浸提24h，长期接触（﹥24h）推荐浸提72h。

细胞密度与染毒时间

体外细胞毒性试验方法

影响细胞毒性试验结果的因素

样品本身材质的毒性

较容易出现不合格样品的分类和举例：

凝胶类：中低频导电自粘胶电极原材料，电极片，心电电极，导电水凝胶，理疗电极片，硅凝胶伤口敷料，冰贴；

橡胶类：避孕套，天然橡胶手术手套，一次性使用无菌注射器用活塞，一次性使用输液器用药液注射件胶垫，一次性使用乳胶导尿管，橡胶片，橡胶胶膜，橡胶带；

布料类：棉，涤纶制品，无纺布，纱布，眼罩，绷带，手术巾，一次性血压袖带，口罩；

塑料类：PVC，PE，聚丙烯，ABS，硅胶，聚氯乙烯，聚四氟乙烯，丙烯腈-丁二烯-苯乙烯塑料，膏类，皮类制品；

金属类：镍钛机用根管锉，镀金牙科车针，一次性使用消化道吻合器，铝合金制品，铜制品；

涂层类：表面镀铂金材料，表面镀铬，不锈钢304，镀银纤维/镀银布料；

聚氨酯类：血压袖带，海绵，负压封闭引流护创套装，PU发泡扶手，护线软管，阻燃聚醚TPU，床垫。

样品有毒成分占整个检测样品的比例

样品原料在加工过程中产生的变化，添加的其他物质造成影响，加工处理过程中的残留物

浸提面积，比例不准确导致浸提液变少

检测方法的不同造成的结果的差异性

不同方法的适宜性