黄曲霉毒素（AFT）是一类毒性极强的化合物，具有强致癌性，有B1、B2、G1、G2、M1、M2六种，广泛存在于发霉粮食及其制品中，特别是花生、玉米及其制品。AFT其毒性远远高于氰化物、砷化物及有机农药的毒性，其中以B1毒性最大、致癌力最强，M1、G1次之，其毒性作用主要是对肝脏的损害。如果奶牛吃了被黄曲霉毒素污染的谷物或饲料，牛奶就会被污染，国家质检总局规定AFB1是大部分食品的必检项目之一。

适用于牛奶、奶粉中黄曲霉毒素的检测。

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

高效液相色谱仪，紫外检测器，SPE固相萃取装置，旋转蒸发仪，真空泵，涡旋振荡仪，离心机。

试剂材料

市售浓缩牛奶，黄曲霉毒素B1标品，乙腈、异丙醇（均色谱纯），无水乙醇、三氟乙酸、正己烷（均为分析纯）。

色谱柱：ATEO-C18（5 μm，120Å，4.6×250 mm，订货号：152200542）

SPE柱：AE.SPE-AFT（1500 mg/12mL）

样品提取

准确称取2 g牛奶于50 mL离心管中，加入2 mL乙腈，充分振荡1min；再加入4 mL乙腈，充分混合1 min；4000 r/min离心5 min，取上清液4 mL待净化。

SPE柱净化

（1）活化：使用前先将小柱保护液自然流出，再加10 mL乙腈进行活化，流出液弃去。

（2）上样：将待净化液加入已活化好的固相萃取柱中，以1 mL/min的流速过柱，收集流出液。

（3）洗脱：用10 mL乙腈洗脱，收集流出液，合并步骤（2）、（3）流出液。

（4）重新溶解：流出液于40℃下减压蒸馏至体积约2 mL，冷却后向旋蒸瓶中加入5 mL无水乙醇，继续减压蒸馏至完全干燥。

（5）衍生：冷却后，依次加入0.5 mL 正己烷和0.5 mL三氟乙酸，充分混匀衍生液，45℃静置10 min。待衍生液挥干后，用10% 乙腈水溶液定容至0.5 mL，0.45 μm微孔滤膜过滤，供HPLC测定。

液相色谱条件

色  谱  柱：ATEO-C18（250 * 4.6 mm，5 μm）

检  测  器：UV2996型紫外/可见光检测器

检测波长：UV360 nm                

流  动  相：A：B=65:35   A：100% 水   B：甲醇/乙腈（v/v=1/1）

流        速：1.0 mL/min

柱        温：30℃

进  样  量：20 μL

采用上述方法进行固相萃取和高效液相色谱检测牛奶中的黄曲霉毒素，添加回收率达86.77%，表明使用AE.SPE-AFT固相萃取柱及ATEO-C18柱，可检测乳制品中黄曲霉毒素B1。