引言
阪崎肠杆菌存在于婴儿奶粉及含乳的婴儿配方食品中，可导致婴儿脑膜炎、败血症、坏死性小肠结肠炎，发病婴儿的死亡率高达40％～80%。因此对婴儿奶粉及制品中阪崎肠杆菌进行监测十分重要。
1、设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
1.1 恒温培养箱：25 ℃±1 ℃，36 ℃±1 ℃，44 ℃±0.5 ℃。
1.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。
1.3 恒温水浴箱：44 ℃±0.5 ℃。
1.4 天平：感量 0.1 g。
1.5 均质器。
1.6 振荡器。
1.7 无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。
1.8 无菌锥形瓶：容量 100 mL、200 mL、2000 mL。
1.9 无菌培养皿：直径 90 mm。
1.10 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。
1.11 全自动微生物生化鉴定系统。
2 培养基和试剂
2.1 缓冲蛋白胨水
2.2 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素
2.3 阪崎肠杆菌显色培养基。
2.4 胰蛋白胨大豆琼脂
2.5 生化鉴定试剂盒。
2.6 氧化酶试剂
2.7 L-赖氨酸脱羧酶培养基
2.8 L-鸟氨酸脱羧酶培养基
2.9 L-精氨酸双水解酶培养基
2.10 糖类发酵培养基
2.11 西蒙氏柠檬酸盐培养基
第一法 阪崎肠杆菌的检验
3 检验程序
阪崎肠杆菌检验程序见图 1。
4 操作步骤
4.1 前增菌和增菌
取检样 100 g（mL）加入已预热至 44 ℃装有 900 mL 缓冲蛋白胨水的锥形瓶中，用手缓缓地摇动至充分溶解，36℃±1℃培养 18 h±2 h。移取 1 mL 转种于 10 mL mLST-Vm 肉汤，44℃±0.5℃培养24 h±2 h。
4.2 分离
4.2.1 轻轻混匀 mLST-Vm 肉汤培养物，各取增菌培养物 1 环，分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色培养基平板，36 ℃±1 ℃培养 24 h±2 h。
4.2.2 挑取 1 个～5 个可疑菌落，划线接种于 TSA 平板。25 ℃±1 ℃培养 48 h±4 h。
4.3 鉴定
自 TSA 平板上直接挑取黄色可疑菌落，进行生化鉴定。阪崎肠杆菌的主要生化特征见表 1。可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。
表 1 阪崎肠杆菌的主要生化特征
5 结果与报告
综合菌落形态和生化特征，报告每 100 g（mL）样品中检出或未检出阪崎肠杆菌。
第二法 阪崎肠杆菌的计数
6操作步骤
6.1 样品的稀释
6.1.1 固体和半固体样品：无菌称取样品 100 g、 1 0 g、1 g 各三份，加入已预热至 44 ℃分别盛有 900 mL、90 mL、9 mL BPW 中，轻轻振摇使充分溶解，制成 1:10 样品匀液，置 36 ℃±1 ℃培养 18 h±2 h。分别移取 1 mL 转种于 10 mL mLST-Vm 肉汤，44 ℃±0.5 ℃培养 24 h±2 h。
6.1.2 液体样品：以无菌吸管分别取样品 100 mL、10 mL、1 mL 各三份，加入已预热至 44 ℃分别盛有 900 mL、90 mL、9 mL BPW 中，轻轻振摇使充分混匀，制成 1:10 样品匀液，置 36 ℃±1 ℃培养 18h±2h。分别移取 1 mL 转种于 10 mL mLST-Vm 肉汤，44 ℃±0.5 ℃培养 24 h±2 h。
6.2 分离、鉴定
同 4.2，4.3。
7结果与报告
综合菌落形态、生化特征，根据证实为阪崎肠杆菌的阳性管数，查 MPN 检索表，报告每 100 g（mL）样品中阪崎肠杆菌的 MPN 值。
