【问】单抗制品在上游的清洁验证中有哪些关注点和实施要点?
【答】清洁验证是单克隆抗体生产过程中重要的一环，主要是针对与产品直接接触的非一次性使用 (重复使用) 的设备系统。对这些设备进行清洁，并对清洁流程做验证的目的是避免污染和交叉污染。清洁验证策略及分析见本分册生物制品 (单抗) 部分“2.8 清洁验证”。结合上游生产工艺特点，本章节选择典型的不锈钢反应系统模式就清洁验证的三个阶段应用展开讨论。
[实例分析]
实例3: 不锈钢反应器系统清洁验证示例某单抗生产车间拥有6个6000L的不锈钢反应器 (图4-2) ，已知在种子扩增线是使用一次性反应器，在细胞培养阶段是使用600OL的不锈钢生物反应器。
结合单抗的细胞培养工艺进行风险评估，针对一次性系统和不锈钢做相应的区分，本例着重陈述不锈钢系统。
阶段1: 清洁工艺设计与开发一一细胞培养阶段的工艺步骤主要是复苏/扩增/培养/收获，目标残留物来源于过程的培养基或者培养基添加物、细胞碎片、蛋白残留、代谢产物、消泡剂、清洁剂等。选择有代表性的残留目标物类型，综合考虑黏度、溶解度、细胞数量规模以及表达量等。对于细胞培养阶段代表性污染物的物料应选择活细胞密度最高和产品浓度最高的介质，因此对涉及细胞产物的系统一般会选择细胞收获前培养液作为研究开发的代表性目标残留。对于培养基配制系统应综合考虑培养基黏度、配比浓度、配制体积等，选择最难清洗的培养基作为残留目标。
根据蛋白特性以及培养基/配制缓冲液，选择合适浓度的氢氧化钠进行清洁。如涉及特殊蛋白残留需使用其他清洁剂，需同时考虑清洁剂残留的研究。根据生产工艺，选定某种最难清洗的缓冲液以及细胞培养收获液中间品作为最差条件，结合清洁参数进行小规模实验;结合不锈钢反应器的材质，针对不同材质/粗糙度进行分类并考虑做 TOC擦拭和淋洗水回收率的研究。需要注意研究物料的来源应该具有代表性。
特别地，在做清洁方法开发时，需要考虑系统完整的边界，如重复使用的不锈钢系统范围，以及涉及的连接部件处、密封处均应覆盖,以确保清洁方法的有效性。建议在做系统设计时就考虑适合的材质以及可更换性和易操作的更换方式，避免清洁死角。
阶段2: 清洁方法验证一一方法开发完毕后，结合不锈钢系统的实际系统设计及施工进行充分的风险评估，需考量系统中多个生物反应器的安装差异 (如管路长度/阀门安装角度等)等因素，综合考虑生物反应器的机械结构/物理特性构造的一致性后，可采用分组方法进行清洁验证。应依据分组中的生物反应器系统情况选择最差条件，执行三轮清洁验证，组内的其余反应器作为子反应器各执行一轮清洁确认。此处的最差条件应综合考虑输送管路距离、物料特性、介质在系统停留时长及清洁剂的溶解度等多种因素。对于主反应器需执行的清洁验证轮次，企业可结合自身的工艺认知、平台经验以及生物反应器等同性研究数据等综合考虑，进行充分科学的风险评估，同时保证总清洁轮次不少于三次以体现清洁工艺的有效重现性。由于清洁验证是需要在生产条件下进行，需要考虑结合实际生产轮次执行。
一般情况下，清洁验证是伴随着商业化生产规模执行，通常应不晚于工艺验证结束。如配合工艺验证批次执行，需要考虑两种验证的策略配合度。当清洁验证未完成时，伴随每次的生产应进行相应的清洁确认以保证下一次生产的安全使用，直到清洁验证完成。
阶段3:清洁验证状态维护一一当初始清洁验证完成后，企业应根据验证结果进行风险评估以确定再验证的频率，可通过周期性监控确认清洁工艺的稳定性。企业可依据评估选择关键清洁效果的指标并使用统计方法来考察清洁工艺的稳定性。
