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揭秘ELSD检测器使用的流动相及注意事项

嘉峪检测网        2023-10-10 18:01

ELSD检测器作为一种通用型检测器,对于无紫外吸收的样品,应用非常广泛,如碳水化合物、脂类、表面活性剂以及合成聚合物等,几乎所有的液相色谱实验室中都会标配几台ELSD,使用ELSD时要注意哪些问题你知道吗?一起来了解下吧。
 
一、用于ELSD的流动相都有哪些
 
所有在 LC/MS 中使用的挥发性溶剂均可在 ELSD 中使用。其中包括:酸(甲酸,乙酸,三氟乙酸等),碱(氨,三乙胺等),缓冲剂(甲酸铵,乙酸铵,碳酸铵等),离子对试剂(五氟丙酸,七氟丁酸等),这些化合物可以方便地修饰流动相以分离复杂样品。
 
而非挥发性添加剂(如磷酸钠或磷酸钾或硫酸钾)与 ELSD 不相容,不可使用。它们可能会污染甚至严重损坏探测器的某些部分,这些添加剂可以容易地被相应的挥发性添加剂替代。
 
二、ELSD检测器的特点
 
蒸发光散射检测器用于液相色谱系统,分析任何挥发性低于流动相的化合物。ELSD的应用范围包括:碳水化合物,药物,脂类,甘油三脂,未衍生的脂肪酸和氨基酸,聚合物,表面活化剂,营养滋补品,及组合分子库等。蒸发光散射检测器消除了常见于其他HPLC检测器的问题。示差检测受溶剂前沿峰的干扰使得分析复杂化,并且由于对温度其敏感使得基线不稳定,与梯度洗脱不相容。另外,示差检测器的响应不如ELSD灵敏。而低波长紫外检测器在急变梯度条件下受基线漂移的困扰,并要求被分析化合物带有发色团。ELSD则不受这些限制。不同于这些检测器,ELSD能在多溶剂梯度的情况下获得稳定的基线,使得分辨率较好、分离速度更快。另外,因为ELSD的响应不依赖于样品的光学特性,所以ELSD检测时样品不要求带有发色团或荧光基团。
 
蒸发光散射检测器的检测是基于当分析物颗粒传过多色光束时引起光子的散射的性质。HLPC中的液体洗脱液首被雾化,形成的含有被分析物的气溶胶,然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发,zui后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。检测信号的弱与物质的质量多少成正比,物质无需拥有任何发色团、荧光团或电活性。所以任何可以被HPLC分离的化合物均可被蒸发光检测器检测。蒸发光散射检测器是质量灵敏型检测器,其响应度直接和被分析物在样品中的质量成正比,不受官能团或发光团的限制,化合物的相对数量可以容易地被计算出来。可检测任何非挥发性分析物,并可以使用梯度洗脱化分离效果。可以与质谱联用完成被分析物的整体分析。
 
三、ELSD的参数如何优化
 
蒸发温度是ELSD更重要的参数。温度依据流动相的沸点。
 
对于非挥发性化合物,选择高蒸发温度(例如50-60°C)以完全蒸发流动相,从而更小化基线噪音并获得更高灵敏度。
 
ELSD检测器在蒸发温度上不断进行改进,低温蒸发型ELSD优势使半挥发性和热不稳定化合物具有更高的灵敏度。实际上,仅将温度设定在25-30℃范围内也可为这些化合物提供较高信号,同时不会影响流动相的蒸发。
 
四、蒸发光散射检测器使用中的注意事项
 
对每个色谱工作者来说蒸发光散射检测器是一种*的一起,它可以检测到没有紫外吸收的有机物质,它在色谱工作中起到举足轻重的检测作用,蒸发光散射检测器的特点以及使用注意事项:
 
1、洗脱液需要雾化,所以雾化气流的纯度和压力会影响检测器的信噪比。
 
2、流动相要蒸发掉,所以不能使用不易挥发的物质来调节流动相的pH值。可以通过蒸发温度的调节来使比被测物质沸点低的组分蒸发。在不使被测物质蒸发的前提下,温度越,流动相蒸发越*,色谱图基线越好、信号比就越。如果被测物质沸点接近或低于流动相的蒸发温度,则无法检测,沸点比水低的有机物质*可以用气相色谱仪进行分离检测了。由于流动相和溶剂都蒸发了,使用ELSD检测器收集的色谱图一般没有溶剂峰;而且梯度洗脱没有折光视差效应,一般不会出现基线漂移。而用ELSD的检测方法消除了传统HPLC的检测方法中的难点,它的响应不依赖于样品的特性,ELSD的响应值与样品的质量成正比,因而能用于测定样品的纯度或者检测未知物。
 
3、检测光散射变化,进入到散射池的物质都可被检测,而且响应值只与物质的量也就是物质的质量有关。
 
4、浓度跟峰面积不成线性,分别取自然对数后成线性。
 
蒸发光散射检测器的原理和检测方法:
 
在色谱仪洗脱液进入检测器中之后,首经过压气流雾化,雾化之后形成的小液滴进入蒸发阶段,蒸发之后剩下的小液滴进入散射池,光束经过散射池时,散射光波被光电管接受之后会形成一种电信号,而电信号通过电路的模拟,放大,转换之后成为了色谱工作站的数字信号,也就是色谱图。
 
蒸发光散射检测器检测只要分为三个步骤:
 
  (1)用惰性气体雾化脱洗液
 
  (2)流动相在加热管(漂移管)中蒸发
 
  (3)样品颗粒散射光后得到检测
 
 

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来源:北京药研汇