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技术前沿 ┃ 如何实现沙门氏菌24小时快速增菌检测

嘉峪检测网        2015-11-16 00:08

MicroFast沙门氏菌快速增菌培养基是专为沙门氏菌的快速增菌而设计,该培养基能够促进沙门氏菌的快速增殖,抑制竞争菌的生长,从而达到沙门氏菌的快速增殖。

 

实验通过三种不同培养基对沙门氏菌菌的复苏效果的比较,可以看出MF培养基对于冷损伤和热损伤的该菌具有三种中最高的复苏效果,且8h的复苏效果和国标24h的复苏效果相同或者更优。测定沙门氏菌在不同培养基中的生长曲线,可以得到在MF培养基中,杀菌氏菌具有最高的生长速度。经过优化的培养基仍然保持了沙门氏菌菌增菌的特异性。综上,MF培养基时一种能够实现沙门氏菌菌快速、特异增殖的培养基。

注:MICRO FAST 培养基以下简称MF培养基、BPW为GB/T 4789.4-2010要求培养基、*FM为某国外品牌培养基

 

1.修复能力(比较MF、BPW和*FM培养基的复苏效果)

1)热损伤模型制备:经过试验,选取55℃,加热15min的方法建立热损伤模型

2)冷损伤模型制备:选取-20℃冷冻,然后解冻建立冷损伤模型

3)试验方法:分别对冷损伤组和热损伤组进行检测。相同浓度的沙门氏菌菌分别用上述方法进行建模,将建模后的沙门氏菌,分别加入到96孔板中,并用不同的培养基进行复苏培养,分别培养8h,24h,然后接种于选择性培养基中继续培养24h,最后用显色平板进行确认。

4)结果分析:

通过图1我们可以看到MF培养基对热损伤和冷损伤菌的修复效果菌优于PBW和*FM培养基。

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2.扩增速度

1)实验方法:分别选取6株不同的沙门氏菌标准菌株(菌株编号分别为:),重新活化培养,技术后,分别在三种不同的培养基内进行培养,分别于0h、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h取适量于600nm处测定OD值,并取平均值,并绘制生长曲线。

2)结果分析:

图3表明沙门氏菌菌在MF培养基的生长速度均优于BPW和*FM培养基,进口*FM培养基优于BPW.

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3.特异性

1)实验方法 将干扰菌株接种于不同培养基中,培养18小时,观察培养管的浑浊程度,并对结果进行统计。

2)结果

表1说明了三种培养基均能抑制革兰阳性菌。其中MF对大肠杆菌的抑制效果最好,能够避免样品中的大肠杆菌对实验结果的影响。

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4、实际样品检测

1)实验方法

(1)将猪肉分割成14块25g左右的肉块,做以下处理(每块肉单独处理),4度放置过夜。

组别

样品处理

数目

对照组

实际样本(不添加阳性菌株)

4

低菌组

低菌量(5 CFU/25 g

12

高菌组

高菌落(50 CFU/25 g

12

注:猪肉中本身菌数:6.1*104cfu/g

(2)MF快增法

a. 一步增菌(42度):

取上述7个样本分别转接至225mL快速增菌培养基(FM)中的PM中:

分别为:对照组、低军组、高菌组,培养约6 h。

b. 二步增菌(42度):

取上述增菌液0.1 mL,转接至1 ml SM中,42度培养约18h。

c. 转接至显色培养基(OXIOD沙门显色平板)中。

(3)国标法

a.一步增菌

将另一半样本分别转接至225mL BPW中,36度培养8h。

分别为:对照组、低军组、高菌组,培养约24 h。

b.二步增菌:

取上述增菌液1mL,转接至10 ml SC中,培养 18h。

c.转接至显色培养基(OXIOD沙门显色平板)中。

2)结果

通过显色培养基对比结果,FM快速增菌培养基中几乎无除沙门氏菌以外的杂菌长出,而GB增菌后,杂菌较多,所以MF培养基的选择性要远远高于国标培养基。

 

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来源:良润生物