摘要Abstract

目的：设计并实施化妆品中防腐剂的测定能力验证项目，以４-羟基苯甲酸甲酯为例，旨在了解和评价化妆品检验机构对化妆品中防腐剂的检测能力，分析影响检测结果的主要因素，为提升相关实验室检测水平提供参考。方法：制备能力验证样品，对样品的均匀性和稳定性进行检验，采用稳健统计方法对各参加实验室的测定结果进行统计分析，采用ｚ比分数对测定结果进行评价。结果：能力验证样品的均匀性和稳定性符合要求。69家实验室报名参加，66家反馈了测定结果，其中60家结果为“满意”，2家结果为“可疑”，4家结果为“不满意”，总体满意率为90.9％。结论：大多数参加实验室结果为满意，具有较好的测定化妆品中防腐剂的能力，部分实验室的检测能力有待进一步提升。

Objective To design and implement a proficiency testing program for the determination of preservatives in cosmetics using methyl 4-hydroxybenzoate as a representative analyte. The aim is to assess the testing capabilities of cosmetic inspection institutions identify the causes of deviations and promote improvements in laboratory performance. Methods Proficiency testing samples were prepared and tested for homogeneity and stability. Robust statistical methods were applied to analyze the measurement results from participating laboratories with z-scores used for performance evaluation. Results The homogeneity and stability of the samples met required specifications. Among 69 registered laboratories 66 submitted valid results. The outcomes demonstrated 60 satisfactory results. 2 were questionable and 4 were unsatisfactory resulting in an overall satisfactory rate of 90.9%. Conclusion The majority of participating laboratories demonstrated adequate proficiency in determining preservatives in cosmetics though further improvement is needed for some laboratories.

关键词Key words

化妆品；能力验证；防腐剂；4-羟基苯甲酸甲酯；稳健统计

cosmetics；proficiency testing；preservative；methyl 4-hydroxybenzoate；robust statistical method

防腐剂是化妆品配方中的重要组成部分，化妆品中添加防腐剂可以有效抑制微生物的生长，保障化妆品的质量安全[1] 。然而，研究表明防腐剂是导致皮肤化妆品过敏和接触性皮炎的第二大过敏原，不当使用会引起皮肤的不良反应，因此化妆品中防腐剂的使用种类和添加量受到严格监管[2] 。目前，我国《化妆品安全技术规范(2015 年版) 》[3] 采用正面清单的方式，列出了51 种准用防腐剂，并规定了使用范围和限量。对羟基苯甲酸酯类防腐剂是一种广谱抑菌剂，通过破坏微生物的细胞膜并抑制微生物细胞的呼吸链，从而抑制微生物的生长。但相关研究[4-6] 表明, 长期使用可能会影响生殖系统、神经系统和脂代谢等。4-羟基苯甲酸甲酯是对羟基苯甲酸酯类的一种，广泛应用在各种化妆品中，是化妆品中添加频率较高的一种防腐剂。根据《化妆品安全技术规范(2015 年版) 》的规定，其使用限量为0.4%。因此，准确测定化妆品中4-羟基苯甲酸甲酯的含量对化妆品检验检测具有重要意义。

能力验证是实验室质量管理的重要工具之一。通过组织实验室间比对，可以系统评估实验室的检测技术水平，分析潜在的问题, 并为实验室提供改进方向。这种评估机制不仅有助于提升实验室的技术水平，还是实验室提供获得外部认可、提升信誉和竞争力的有效途径。定期参加能力验证，可以有效保障实验室检测结果的准确性和可靠性[7-8] 。

在此背景下，为了全面了解和系统评价化妆品检验机构对化妆品中防腐剂的检测能力，中国食品药品检定研究院以4-羟基苯甲酸甲酯为检测对象，组织开展了化妆品中防腐剂的测定能力验证。本研究对此次能力验证的相关工作进行梳理总结，分析造成结果偏离的可能因素，旨在为实验室进一步提升检验检测能力和改进质量管理水平提供参考。

1 材料与方法

1.1 仪器

e2695 型高效液相色谱仪( 配二极管阵列检测器，美国沃特世公司) ；Unitary C18 型色谱柱[250 mm×4.6 mm，5μm，华谱科仪(大连) 科技有限公司]；AL204 型电子天平(感量为0. 01mg，瑞士梅特勒-托利多公司)；Multi Vortex 型多样品涡旋混合器(广州得泰仪器科技有限公司)；arium Pro-DI 型超纯水仪(德国赛多利斯公司)； 2127QT 型机械超声波清洗机( 北京科玺超声波清洗机有限公司)。

试剂：4-羟基苯甲酸甲酯对照品(纯度99.8%，批号F0032400，北京曼哈格生物科技有限公司)。

1.2 样品制备、均匀性和稳定性试验

1.2.1 样品制备

本次能力验证样品的基质为乳液。为了使样品更接近日常检测的实际情况，样品制备采用市售品牌化妆品进行二次混匀和分装。分装容器为无菌白色医用塑料瓶，瓶身贴标签并标注样品编号和储存温度等信息。每瓶样品装量不小于10 g，共制备两种浓度的样品，分别标记为样品A 和样品B，其中样品A 为考核样，用于最终数据统计；样品B 为干扰样，用于防止实验室间串通数据，不参与统计分析。所有样品制备完成后，置于常温常湿避光条件下保存。

1.2.2 均匀性试验

依据《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》[9] ( CNAS-GL003：2018) 的相关要求，对样品的均匀性进行考察。采用简单随机抽样法从样品A 中随机抽取15 瓶样品，每瓶样品平行测定两次，采用单因素方差分析对测定结果进行统计分析。以95%置信区间判断样品的均匀性，当测定结果的F 值小于查表值Fcrit 时，认为样品是充分均匀的。

1.2.3 稳定性试验

在样品的实际储存状态下，分别于发样前和结果回收后对样品的稳定性进行检验，时间覆盖整个能力验证计划周期。采用简单随机抽样法分别从样品A 中随机抽取3 瓶样品，每瓶样品平行测定两次，将均匀性检测结果作为稳定性0 月的数据，分别与发样前稳定性检测结果和结果回收后稳定性检测结果进行双样本等方差假设的t 检验，当测定结果的t值均小于95%置信区间查表值tcrit 时，认为样品在整个能力验证计划周期内是稳定的。

1.3 样品发放

采用随机分配的方式，分别给每个参加实验室随机分配一瓶样品A 和一瓶样品B，参加实验室按照作业指导书的要求对样品进行保管和检测，并在规定时间内提交检测结果。

1.4 检测方法

本次能力验证要求按照《化妆品安全技术规范(2015 年版) 》4.1 甲基异噻唑啉酮等23 个组分的方法进行检测。

1.5 数据统计与结果评价

能力验证统计方法的选择依据数据结果的总体分布特征。参考《能力验证结果的统计处理和能力评价指南》[10] (CNAS-GL002：2018)，若数据呈现接近正态分布的特征，可采用稳健(Robust) 统计方法进行分析，即采用z 比分数对结果进行评价，按照公式(1) 计算。

z = (x-X ) / NIQR 公式 (1)其中，x 表示参加实验室的检测结果，X 表示指定值及所有参加实验室结果的中位值，NIQR 为能力评定标准差，即所有参加实验室结果的标准化四分位距。

根据计算得到的z 值, 对结果进行判定：当∣z∣ ≤ 2 时， 表示结果“满意”；当2< ∣z∣ < 3时, 表示结果“可疑”，产生警戒信号，建议实验室复查；当∣z∣ ≥3 时，表示结果“ 不满意( 离群值) ”，产生措施信号，要求实验室开展纠正措施。

2 结果

2.1 样品的均匀性和稳定性

2.1.1 均匀性

对样品A 的均匀性检验结果进行单因素方差分析，结果详见表1。从表中可以看出，检验结果的F 值( 0.99) 小于95% 置信区间的查表值Fcrit(2.42)，P 值(0.50) 大于0.05，表明样品的均匀性满足要求。

2.1.2 稳定性

分别于发样前和结果回收后对样品进行稳定性检验，检验结果与均匀性检验结果进行双样本等方差假设的t 检验，t 值分别为0.33 和0.19，均小于95%置信区间查表值t0.05 (34) = 2.03，表明样品A在整个能力验证计划周期内是稳定的。

2.2 实验室分布情况

本项目共有69 家实验室报名参加，其中3 家实验室因自身原因退出，其余66 家按时反馈了检测结果。这66 家实验室分布于全国24 个省( 自治区、直辖市)，具体分布如下：市场监管局或药监局食品药品检验机构58 家( 占比87.88%)，海关检验机构1 家(占比1.52%)，疾控检验机构1 家( 占比1.52%) 和第三方检验机构6 家( 占比9.09%)。具体分布情况详见表2。

2.3 能力验证结果统计

回收结果的数据分布特征：根据66 家实验室检测结果的浓度值及其频数绘制直方图，并进行正态拟合分析，结果见图1。数据满足单峰、近似正态分布的特征，适宜采用稳健统计的方法进行分析。

检测结果总体统计量：对回收的结果进行总体情况统计，主要参数和结果详见表3。

2.4 能力验证结果评价

计算各参加实验室检测结果的z 比分数，并对各参加实验室的检测结果进行评价。总体结果评价情况详见表4。将66 家实验室检测结果的z 比分数，按照从小到大的顺序排列，绘制成柱状图，结果见图2。66 家实验室中，60 家结果为“ 满意”，2 家结果为“可疑”，4 家结果为“ 不满意”，总体满意率达90.9%。

3 讨论

3.1 不满意结果原因分析与建议

3.1.1 标准曲线

标准曲线的使用是否正确直接关系到检验结果的准确性。在审查原始记录时，发现部分实验室存在标准曲线使用不合理的问题。具体表现在以下几方面：①部分样品的检测浓度超过标准曲线的最高点；②部分标准曲线点数过少，且样品检测浓度接近标准曲线最低浓度点；③部分标准曲线浓度梯度分配不合理。这些都可能导致定量结果出现偏差。标准曲线的正确使用原则是，样品的检测浓度最好位于标准曲线1/3~2/3 的浓度范围内[11] ，可先进行预实验，确定样品的浓度范围，根据样品的浓度调整标准曲线的范围；也可对样品进行适当稀释，使其检测浓度落在上述合适区间内，以提高分析准确度。

3.1.2 色谱柱和流动相

色谱柱类型和流动相组成是影响高效液相色谱分离的重要因素。色谱柱的键合工艺和封尾技术等制备工艺的不同会导致不同化合物的选择性差异较大，从而影响色谱峰之间的分离度和出峰顺序[12] 。不同的溶剂会影响化合物的溶解度和稳定性，进而影响分离效果。通过查看原始记录，个别实验室由于采用的色谱柱类型及流动相的组成与标准方法存在显著差异，导致色谱峰出峰个数不同于其他实验室，推测色谱条件可能不合适，导致目标组分和杂质色谱峰没有完全分离，使检测结果出现严重偏差。

3.1.3 其他

除上述问题外，还应注意以下几个方面。一是使用前应对天平进行校准，并避免振动、气流和温度波动等因素干扰，确保称量准确。二是乳液状样品称量时应注意不要沾瓶口，并确保液面位置处于刻度线以下，以保证定容准确。三是对照品称量、定容和稀释过程操作准确，并注意纯度的换算关系，确保实验数据可靠。四是定期对超声仪器进行检查，确保其频率、功率等参数满足试验要求，样品提取完全[13] 。五是仪器设备的性能和状态应调节至最佳状态，以确保检测结果的准确性。

此外，部分实验室原始记录填写过程中，存在内容较少，实验步骤不全等问题，原始记录填写应完整、准确和清晰，便于对数据进行溯源和问题分析。

3.2 总结

本次能力验证测定了化妆品中4-羟基苯甲酸甲酯的含量，共66 家实验室参与。本次能力验证的满意率为90.9%，大部分实验室获得了满意结果，个别实验室需开展自查，找出问题根源，制定有效的整改措施，提升检测能力。

能力验证的目的是通过实验室间比对，客观评估实验室在特定检测或校准领域的实际能力，帮助实验室识别潜在的风险点，促进实验室技术能力和管理水平的提高[14-15] 。对于能力验证的结果，应进行客观分析和合理利用，避免过度解读单次结果。单次能力验证结果仅反映实验室的当前测试能力，只有连续参加能力验证并分析结果趋势，才能识别实验室测试能力的长期稳定性[16-17] 。为进一步提升检测水平，实验室应注重加强日常质量管理，制定操作规程，加强人员培训，加强内部质量控制，不断提升检验检测水平，以保障检验工作的有效开展。