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液相分叉峰产生原因及解决办法

嘉峪检测网        2023-11-30 08:19

在HPLC中,色谱峰的顶端出现分叉的峰叫做分叉峰,分叉峰的出现与样品的进样量和色谱柱等因素有关。
 
分叉峰
 
分叉峰原因及解决方法
 
溶剂效应
 
原因:大体积进样,导致样品产生的峰过早的洗脱出色谱柱,从而导致分叉峰。
解决方法:对样品进行蒸发浓缩,从而减少进样体积;或者进样溶剂改为用水稀释,与流动相更为兼容,即使进样体积较大也不会出现峰变形。较早流出的峰或靠近溶剂前沿的峰更容易出现拖尾。在液相色谱中用溶于流动相的小体积进样最为理想。
注意:样品要现配现用,避免样品溶解液的有机相比例、pH值发生变化而导致的溶剂效应
 
色谱柱筛板堵塞
 
原因:色谱柱的进出口的筛板堵塞,样品进入色谱柱时会受阻,液体流动受阻形成延迟,使得样品在相中停留时间变长,从而使峰型拖尾。
解决方法:
配置流动相时污染流动相使用色谱纯溶液,现配现用,并通过4.5um滤膜过滤后方可使用。
型号规格插口不匹配,在扭紧的时候造成形变而促使管道阻塞。色谱柱有物理损坏是会造成峰形拖尾。唯一的解决方法就是更换新柱。
样品存在杂质,导致堵塞在筛板处,过滤样品
应用较高浓的缓存盐溶液,在关机时将会在出入口端结晶体成块并导致阻塞。
适当降低温度,让试剂溶解得慢一些。
如以上方法都不能解决堵塞问题,则需考虑换一根新的色谱柱。
 
保护柱或色谱柱污染
 
原因:复杂的样品基质容易造成保护柱阻塞或污染,进而产生色谱峰分叉的现象。色谱柱在开始使用时没问题,而使用一段时间后出现峰分叉的现象,很可能是由于色谱柱阻塞或者被污染引起。
解决方法:取下保护柱再进行分析,如有必要可更换保护柱。如果色谱柱阻塞,拆下来清洗,如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,建议将更换色谱柱。
 
色谱柱塌陷
 
原因:色谱柱通常都有其适用的pH、温度范围,若使用不当会造成色谱柱填料塌陷,从而导致色谱峰分叉。
解决方法:由于色谱柱塌陷引起的色谱峰分叉很难修复,建议更换新的色谱柱。
 
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