3.3准确度

 

一定的准确度为定量测定的必要条件，因此涉及到定量测定的检测项目均需要验证准确度，如含量测定、杂质定量试验等。准确度应在规定的范围内测试。实验设计需考虑在规定范围内，确定3个不同浓度，每个浓度配制3份样品，至少测定一次。计算已知加入量的回收率及回收率的RSD，即实际测得量与理论投入量的比值（%）。

 

3.3.1含量测定的准确度验证

 

原料药可用已知含量的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较；用对照品设计3个不同浓度，一般为标示量80%、100%、120%三个浓度，每个浓度分别制备3份供试品溶液，每个溶液至少测定一次，计算回收率。接收标准：回收率应在98.0%~102.0%之间，回收率的RSD应≤2.0%，或已执行批准的验证方案。

 

3.3.2杂质定量测定的准确度验证

 

杂质的定量试验可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较，如药典标准方法或经过验证的方法。推荐选用定量限浓度或限度浓度的50%、限度浓度的100%、200%三个浓度，每个浓度配制3份溶液，每份测定1次，或执行已批准的验证方案。

 

推荐接受标准如下：

 

限度	回收率	回收率的RSD
定量限浓度	70%~130%	RSD≤15.0%
<0.5%	80%~120%	RSD≤10.0%
0.5%≤限度<5%	90%~110%	RSD≤5.0%
≥5%	95%~105%	RSD≤2.5%

 

3.3.3容量分析法的准确度验证

 

推荐选用确定相当于供试品溶液浓度的80%、100%、120%三个浓度，每个浓度配制三份溶液，每份测定1次，回收率标准一般为98.0%~102.0%。

 

3.3.4残留溶剂准确度验证

 

推荐选用杂质定量测定的准确度验证要求及标准执行。

 

3.4精密度

 

精密度一般用偏差、标准偏差、相对标准偏差表示。含量测定和杂质的定量测定应考虑方法的精密度。

 

3.4.1方法精密度（重复性）

 

在规定范围内，至少用9个测定结果进行评价。例如：设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液，进行测定；或将相当于100%浓度水平的供试品溶液，用至少6次的结果进行评价，推荐为同一分析员配制6份供试品溶液，连续进样测定，计算供试品结果的RSD。

 

推荐接受标准如下：

 

名称	单个杂质限度	接受标准
相关物质	<0.1%	RSD≤30%
	0.1%≤限度<0.2%	RSD≤20%
	0.2%≤限度<0.5%	RSD≤10%
	0.5%≤限度<5%	RSD≤5.0%
	≥5%	RSD≤2.5%
含量测定	RSD≤2.0%
残留溶剂	含量≥500ppm，RSD≤10.0%；500ppm>含量>200ppm，RSD≤15.0%；含量≤200ppm，RSD≤20.0%

 

3.4.2中间精密度

 

为考察随机变动因素对精密度的影响，应制定详细方案进行中间精密度试验。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同型号分析仪器（如有）。中间精密度结果的RSD或SD应符合相关规定。推荐采用2位分析员、3天时间、在2台分析仪器上对同一批供试品的检测。杂质检查RSD推荐接收限度如下：

 

限度	接收标准
<0.1%	RSD≤40%
0.1%≤限度<0.2%	RSD≤30%
0.2%≤限度<0.5%	RSD≤15%
0.5%≤限度<5%	RSD≤7.5%
≥5%	RSD≤4.0%

 

杂质检查SD推荐接收标准如下：小于0.2%的杂质，SD≤0.05%；0.2%≤杂质≤0.5%，SD≤0.10%；0.5%<杂质≤1.0%，SD≤0.20%；1.0%<杂质≤2.0%，SD≤0.40%。

 

对于含量测定中间精密度结果推荐接受标准：RSD应≤2.0%。

 

对于残留溶剂测定中间精密度结果可用差值进行评价，推荐接收标准：含量≥500ppm，RSD≤10.0%；500ppm>含量>200ppm，RSD≤15.0%；含量≤200ppm，RSD≤20.0%。

 

对于有关物质及残留溶剂中未检出或检出量不大于定量限应采取加样方式进行试验，推荐加入杂质（或溶剂）限度的30%~70%进行试验。

 

3.4.3重现性

 

分析方法药典标准化或在不同实验室之间进行方法时，应进行重现性试验。系统精密度：可通过溶液的重复进样来确定，一般情况下可通过配制1份溶液，连续进样不少于6次，计算6个结果的RSD；或者配制一份对照溶液（供试品溶液或对照品溶液），连续进样不少于6针，计算6个峰面积的RSD。

 

推荐接受标准如下：

 

溶液名称	接受标准
对照溶液（供试品或对照品溶液）相关物质	RSD≤5.0%
对照品溶液（含量测定）	RSD≤2.0%
对照品溶液（残留溶剂）	RSD≤15.0%

 

3.5检测限、定量限

 

验证检测限在于考察方法是否具备灵敏的检测能力，因此对杂质限度试验，需证明方法具有足够低的检测限，以保证需要控制的杂质被测出；验证定量限体现了分析方法是否具备灵敏的定量检测能力，因此对杂质定量检查，保证含量很少的杂质能够被准确测出。

 

信噪比法：用于能显示基线噪声的分析方法，即把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠的检测出最低浓度或量。一般以信噪比为3±1时的相应浓度确定检测限；一般以信噪比为10±2时的相应浓度确定定量限，连续不少于5次进样确认，信噪比或峰面积的RSD应符合相应的规定，推荐有关物质RSD标准为≤10.0%，推荐残留溶剂RSD标准为≤20.0%，或一般通过下列方式计算信噪比：

 

 

信噪比（S/N）=2H/h

 

其中：H：为峰高，即色谱峰的顶点到基线的距离。一般将基线长度外推值峰高一半处宽度的5倍以上，尽量沿峰尖对称。

 

h：为这一段基线中观察到的最大和最小噪声的差。

 

ICHQ2R1中还介绍了根据响应因子的标准偏差和斜率计算出检测限、定量限的方法

 

 

 

 

 

斜率S根据分析物的校正曲线评估而来，响应因子可采用不同方法获得，如：（a）根据空白溶液的标准偏差：测定分析背景的响应就是通过分析适量空白溶液并计算其响应值的标准偏差；（b）根据校正曲线：用样品建立校正曲线，其中含有检测限范围的分析物，其回归线的剩余标准偏差或回归线截距的标准差作为标准偏差。

 

3.6耐用性

 

开始研究分析方法时，就应考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，则应在方法中写明。耐用性评估的结果建立了一系列的系统适用性参数（如分离度试验），以确保在任何时候使用该分析方法都是有效的。

 

一般典型变化的例子如下：

 

HPLC	流动相比例、pH值	流动相比例的±20%（绝对比例的±5%）；pH值±0.2
	色谱柱	不同厂家或不同批号的同类色谱柱（新方法验证时应用3根色谱柱（若有新购买的3根应用3根新的色谱柱），方法重新验证时用的3根色谱柱应包括新旧色谱柱（若有））
	柱温	±5℃
	流速	±10%
GC	色谱柱	不同厂家或不同批号的同类色谱柱（新方法验证时应用3根色谱柱（若有新购买的3根应用3根新的色谱柱），方法重新验证时用的3根色谱柱应包括新旧色谱柱（若有））
	柱温	±5℃
	流速	±10%

 

对上述各条件进行小的变动，系统适用性参数应符合方法的标准规定，应报告每次色谱柱条件改变后的系统适用性参数（如峰谷比或分离度或理论塔板数等），以确保方法有效。

 

3.7溶液稳定性

 

由于越来越多的仪器使用了自动进样器，因此需要对溶液稳定性进行考察。根据供试品的性质来确定考察周期，可配制供试品溶液、对照溶液（或对照品溶液）置室温（或可以提高条件如冷藏）条件下。至少应考察到24小时溶液的稳定性情况，在不同间隔点进样测定，按初始对照溶液（或对照品溶液）峰面积计算杂质变化；将各间隔点的测定结果与初始结果进行比较，以差值作判断。

 

对照溶液的稳定性通过主峰峰面积的变化情况统计，推荐接受标准如初始值的90%~110%。

 

3.8系统适用性

 

对一些仪器测试方法，在进行方法验证时，有必要将分析设备、电子仪器与试验操作、被测试样品等一起当作完整的系统进行评估。色谱方法对分析设备、电子仪器的依赖程度较高，因此所有色谱方法均应进行该指标验证，并将系统适用性作为分析方法的组成部分。

 

4.方法确认

 

方法确认使用于物料和产品中不需要进行验证的检验方法以及药典方法和其他已验证的法定标准。通过方法确认来证明方法在本试验条件下的适用性，一般用于滴定，色谱程序（有关物质，含量分析，限度测试），光谱测试等。实验室常规测试操作步骤不需要进行方法确认，例如（包括但不限于）重金属、干燥失重、炽灼残渣、各种湿法化学步骤如酸值和简单的仪器方法如pH计，除非有特殊要求。对于方法确认，通常采用由两名检验人员分别独立对同一产品进行检验（如可能，使用不同的仪器），比较两人的检测结果来证明方法在本实验室（人员、分析仪器、试剂等）的适用性。

 

5.方法转移的类型：

 

5.1比对试验

 

比对试验是分析方法转移时最常用的方法，需要接收方和转移方共同对预先确定数量的同一批次样品进行分析。也可以采用其他方法，如：在样品中加人某个杂质的回收率实验，接收方能够达到预先制定的可接受标准。分析时要依据已被批准的转移方案，此方案包括明确列出的细节、使用的样品、预先制定的验收标准和可允许的偏差。检测结果符合预先制订的可接受标准是确保接收方有资格运行诙方法的必要条件。

 

5.2两个或多个实验室间共同验证

 

执行分析方法验证的实验室要具备运行该分析方法的资格。转移方可与接收方一起进行实验室间的共同验证工作，包括接收方可作为转移方分析方法验证团队的一部分，从而获得重现性评估数据。共同验证要按照预先批准的转移或验证方案进行，方案中需说明具体方法、所使用样品和预定的可接受标准。指导原则9101《分析方法验证指导原则》对分析方法验证指标选择提供了指导意见。

 

5.3再验证

 

分析方法转移的可接受方法还包括再验证或部分验证。再验证时应对指导原则9101《分析方法验证指导原则》中收载的可能在转移中受到影响的验证指标进行说明。

 

5.4转移豁免

 

在某些特定的情况下，常规的分析方法转移可豁免。此时，接收方使用转移方分析方法，不需要比对实验室间数据。转移豁免的情况如下。

 

(1) 新的待测定样品的组成与已有样品的组成类似和/或活性组分的浓度与已有样品的浓度类似，并且接收方有使用该分析方法的经验。

 

(2) 被转移的分析方法收载在药典中，并无改变，此时应采用分析方法确认（见指导原则9099《分析方法确认指导原则》）。

 

(3) 被转移的分析方法与已使用方法相同或相似。

 

(4) 转移方负责方法开发、验证或日常分析的人员调转到接收方。

 

如果符合转移豁免，接收方应根据豁免理由形成文件。