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嘉峪检测网 2019-12-03 11:06
〔摘 要〕
目的 对硅凝胶瘢痕贴进行生物学评价，为产品临床应用提供安全依据。
方法 参照GB/T 16886《医疗器械生物学评价标准》的要求，对硅凝胶瘢痕贴进行细胞毒性试验、皮肤刺激试验和迟发型超敏反应试验。
结果 样品的细胞反应为1级，无皮肤刺激反应和致敏反应。
结论 硅凝胶瘢痕贴具有良好的生物相容性。
皮肤损伤是瘢痕形成的主要原因，而皮肤擦伤、烧伤、感染及外科手术等都能造成皮肤损伤，形成瘢痕。瘢痕不仅影响着患者局部外观或者功能，而且常给患者带来局部瘙痒、不适以及疼痛等慢性症状，从而影响患者的日常生活。医用硅胶作为一种高分子有机化合物，有着较好的物理和化学稳定性。从20世纪80年代起，硅凝胶就被用于预防和治疗增生性瘢痕[1]。硅凝胶产品不仅能够有效地预防病理性瘢痕的形成，而且可使瘢痕变软、变薄[2]。但硅凝胶贴类产品在防治瘢痕时，瘢痕部位可能出现皮疹、瘙痒及 感染等并发症。为了系统评估硅凝胶瘢痕贴的生物相容性，本研究按照GB/T 16886《医疗器械生物学评价标准》的要求，对硅凝胶瘢痕贴生物相容性进行安全性评价。
1 材料与方法
1.1 材料
小鼠成纤维细胞L-929（ATCC），胎牛血清（Gibco），胰蛋白酶（Gibco），MTT（美国Sigma公司），MEM（Gibco），完全弗氏佐剂（美国 Sigma公司），成年新西兰兔（华兰生物疫苗有限公司，合格证号：41001700005019），体重2.2~2.7kg，健康初成年白化豚鼠（华兰生物疫苗有限公司，合格证号：41001700005096），体重300~500g。
1.2 方法
1.2.1 体外细胞毒性试验
无菌条件下取样品，按照1.25cm2/ml的浸提比例制备样品浸提液。将处于对数生长期的L-929细胞用胰酶消化后，加入细胞培养液，调整细胞浓度为1×104个/ml。将配置好的细胞悬液接种于96孔板中，每孔100μl。置5% CO2培养箱37℃，培养24h后，弃去原培养液。空白对照组加入新鲜MEM细胞培养液，供试品组加入样品浸提液，阴性对照组加入高密度聚乙烯浸提液，阳性对照组加入含5%二甲基亚砜的培养液，每孔100μl，置CO2培养箱继续 培养72h。更换培养液72h后，将上述各组置于显微镜下观察细胞形态，并在每孔加入5g/L的MTT溶液20μl。继续培养4h后弃去孔内液体，加入150μl 的DMSO，振荡10min后，在570nm和630nm波长下用酶标仪测定吸光度，并计算相对增殖率=试验组吸光值/空白对照组吸光值×100%[3]。按表1进行分级标准判定。
1.2.2 皮肤刺激试验
1.2.3 迟发型超敏反应试验
取豚鼠15只，分为试验组10只和对照组5只，于试验前12h剃除动物左上背被毛。将样品裁剪成2.5cm×2.5cm大小，直接贴敷于试验部位并用绷带固定。对照组使用相同大小的纱布，并固定。6h后，去除包扎。1周中连续3d 重复此步骤，连续3周。最后一次诱导敷贴14d后，去除豚鼠右上背被毛，将样品贴敷6h后去除。对照组使用纱布做相同操作。于去除敷贴后24，48h观察皮肤致敏反应情况，并评级[4]。
2 结果
2.1 细胞毒性试验
倒置显微镜下观察可见，除阳性组细胞数量减少，细胞形态呈球形，其他组别细胞生长状态良好，形态未见异常。MTT结果显示，样品的细胞增殖率为92%。见表2。
表 2 试验样品的细胞相对增殖率
2.2 皮肤刺激试验
试验观察结果表明，除了去除固定1h时可见轻微皮肤红斑和水肿，剩下在时间点均未见动物皮肤出现红斑和水肿，即样品的原发性刺激指数为0。
2.3 迟发型超敏反应
试验观察结果表明，动物在去除固定后24h和48h，皮肤均未出现明显改变，表明试验样品无迟发型超敏反应。
3 讨论
手术后常常留下严重的增生性瘢痕，给患者身心健康带来严重的影响。因此预防和治疗增生性瘢痕显得至关重要。有研究认为，硅胶敷料可以通过“水合作用”抑制瘢痕增生[5]。使用硅凝胶瘢痕贴后，皮肤水分蒸发减少，使皮肤角质层水分增多，从而软化瘢痕。此外，含水的角质层有利于提高氧的通透性，减少了低氧对瘢痕生长的刺激，从而进一步抑制了瘢痕的增生。本研究按照 GB/T 16886《医疗器械生物学评价标准》的要求，采用细胞毒性、皮肤刺激、迟发型超敏反应对硅凝胶瘢痕贴进行生物学安全性评价。结果表明硅凝胶瘢痕贴具有良好的生物相容性。
【参考文献】
［1］Perkins K,Davey RB,Wallis KA.Silicone gel:a new treatment for burn scars and contractures[J].Burns Ind Therm Inj,1983, 9(3):201-204.
［2］Meaume S,Le Pillouer-Prost A, Richert B,et al.Management of scars: updated practical guidelines and use of silicones[J].Eur J Dermatol,2014, 24(4):435-443.
［3］国家药品监督管理局.GB/T16886.10-2005《医疗器械生物学评价 第5部分：体外细胞毒性试验》[S].北京：中国标准出版社，2003.
［4］国家药品监督管理局.GB/T16886.10-2005《医疗器械生物学评价第10部 分：刺激与迟发型超敏反应试验》[S].北京：中国标准出版社，2005.
［5］Mustoe TA.Evolution of silicone therapy and mechanism of action in scar management[J].Aesthetic Plast Surg,2008,32(1): 82-92.
作 者：韩颖，徐玉茵，田林奇，周静，刘康博
单 位：河南省医疗器械检验所
来源：Internet
