分离分析的一个基本要求是能够验证分离物质的纯度，也就是说，确保没有共洗脱的杂质对目标峰响应值得干扰。峰纯度的确认应在定量之前完成。忽视峰纯度确认意味着在质量控制中，一个杂质隐藏在目标峰下可以造成结果失真，或者在研发过程中重要信息可能丢失。在分析方法验证项目（专属性、线性、定量限、检测限、精密度、耐用性）中峰纯度也是需要同时检查的。
接下来我们来看色谱分析两大仪器品牌不同峰纯度的确定方法吧。
Waters
整个峰的纯度由纯度角和阈值角决定。
峰纯度：纯度测试将校正峰顶点处的光谱波形和整个峰的光谱波形，并进行比较。如果峰中间的光谱形状不同，首先应考虑可能与峰光谱波形不同的其它组分与之共洗脱。
纯度角：光谱一致性的一种衡量方法，即将积分峰上每个数据点的光谱与峰顶点光谱进行对照，计算出峰各处的光谱与峰顶点光谱之间的夹角的加权平均值。整个峰的纯度可以通过该值确定。纯度角的范围是从0 ~90度。值小（特别在小于阈值时）表明光谱均匀。值大表明不均匀程度较大
注意事项
1、如果观察到高纯度标准品的纯度不佳，可能是由以下几个主要原因造成的：
A浓度过高
即使只在部分波长下的吸光度超过1AU，也会破坏吸光度线性，导致光谱出现畸变，得到较差的纯度。请降低浓度，确保最大吸收波长处的吸光度不超过1AU，然后再次进行测量。
A 流动相的背景吸光度高
如果在低波长下流动相的背景吸光度比较大，则该波长下吸光度的线性范围较小，测得的光谱会发生畸变。在这种情况下，请在处理方法的“纯度”选项卡上缩小要计算的波长范围，然后重新处理。或者避开背景吸光度较大的波长，然后重新测量。
2、 光谱差异显著的组分应同时洗脱。
检测不到共洗脱的主要原因是光谱相似、含量极少的组分共洗脱，但即使共洗脱组分的光谱差异很大，也可能无法被检测到。那就是共洗脱组分均匀地与主要组分峰重叠的情况。在这种情况下，以相同比率共洗脱的组分在峰基线和峰顶点处与主要组分重叠，而峰基线和峰顶点是判定峰的标准。简而言之，各谱图的波形与两个波形的总和相同，且比率相同。纯度测试无法检测到这种情况。
Agilent
1、将不同波长下采集的色谱图进行对比去寻找不一致的色谱峰。良好的重叠，其中峰形、保留、保留时间匹配，则表示纯峰；而较差的重叠表示不纯峰，如图 1 所示。
图1 通过不同波长下峰信号对比确定峰纯度示意图
2、除了叠加信号外，还应计算它们的比率，并且绘制比率图。生成的比率图是峰值的敏感指标纯度（图2）。任何理想矩形的失真比例图的形式表示杂质。
图2 由比率图确定峰纯度示意图
3、安捷伦的Chemstation软件可以通过计算相似因子来确定峰纯度情况。以下是相似因子的计算公式和不同相似因子色谱峰的示意图（图3）
其中：和分别是在相同波长下采集的第一个和第二个谱图的吸收值；
和分别是第一个和第二个谱图的吸收均值；
N是采样点个数。
