片剂的性状检查是一个重要的物理稳定性考察指标，通过目测法观察片剂表面或除去包衣后片芯的颜色是否符合规定。此外，在片剂的生产环节，如压片、包衣工序也会对其外观进行检查，如片剂表面应无黑点，花面等现象。当片剂性状出现问题后，如何调查分析呢？

本文首先通过一个案例，介绍稳定性考察中片剂出现黑点后的分析思路和解决办法，其次谈一下作者关于类似问题的一些思考，仅供研发同仁参考。

一、案例介绍

【问题描述】

片剂在长期(25˚C/60%RH) 和加速(40˚C/75%RH)条件放置3个月后，在加速条件下出现黑点，变化如下图所示：

【问题调查】

经调查，片剂在放行和生产过程中未见黑点，因此排除了原辅料、生产过程受到污染的可能。经分析，很可能是由于加速稳定性条件下发生了化学变化引起的，因此，继续进行调查。

1、原辅料情况

所有辅料均商业可供，符合USP/EP/JP标准，API在片中含量低为0.1~0.4mg/片。辅料种类如下：

Lactose monohydrate

Hydroxypropylmethylcellulose

Starch 1500 (pregelatinized starch)

Sodiumlauryl sulfate (SLS)

Colloidal silicon dioxide

Magnesium stearate.

2、微生物限度检查

在加速条件下温湿度较高，怀疑可能会产生微生物污染，因此首先把出现黑点的药片进行微生物限度检查，结果表明微生物限度符合规定，说明微生物污染不是引起黑点的根本原因。

3、原辅料相容性研究

由于黑点在产品贮藏过程中产生，因此可能由原料辅料的相互作用产生。因此进行了二元混合试验（辅料/辅料，原料/辅料），并在60 °C 和 40 °C条件下放置6周。每个辅料都采用了3个不同批号，目的是考察辅料批间的差异。片芯和包衣片也进行了放置，考察包衣材料对片芯是否存在影响。

二元混合试验结果表明，在一批SLS中没有出现变色问题，而且，随着温度的升高，药片的变色程度会增加。此外，片芯和包衣片都出现了变色，说明片芯和包衣材料不存在相容性问题。

4、图像和元素分析（SEM/EDS）

采用扫描电子显微镜和能谱分析技术（SEM/EDS）对药片的变色区域（黑点区域）进行检查，在图谱中，白色区域代表片剂中的黑点。EDS图谱中发现药片黑色区域中含有硫元素(S)和钠元素(Na)。处方中含量这两种元素的辅料是SLS，因此判断SLS与黑点的形成有关。

5、不同来源SLS的研究

采用两个不同批号的SLS的4个样品进行研究。批号A是加速试验中产生黑点的批次，批号B来自另一个不同的供应商。这两批样品在室温和60°C条件下放置4周，结果见下表。

结果表明，批号A的SLS样品中出现变色，而批号B的SLS样品中没有出现变色。由于这两批SLS均符合USP/EP/JP，因此继续研究二者之间存在的细微差别。

质谱（MS）分析：将批号A和B的溶液直接进样，进行MS/检测，同时采用正离子和负离子模式进行分析。

上图中的负离子模式质谱图表明，m/z=60.0和212.0峰为空白峰，m/z=265为SLS (C12H25SO4)峰。此外，有两个大峰(m/z=293和97)仅在批号A的SLS中发现，这两个峰归属为十四烷基硫酸(C14H29SO4)和残留的硫酸 (HSO4)。正离子模式峰很多，很难分析，但是批号A明显比批号B峰多。综合正负离子模式的分析可见，批号B的纯度比批号A高，另外值得注意的是批号A的硫酸峰在批号B中没有出现。

药典方法检测结果对比：将两批SLS的QC放行结果进行对比，结果表明，二者虽然均符合USP/EP/JP标准，但是批号A中未酯化醇的含量高于批号B，含量测定结果低于批号B。此外，批号A的碱度和pH值均比批号B低，进一步说明批号A中含有一定量的硫酸。

6、结果讨论

根据上述一系列的调查分析，药片的变色与处方中SLS中的杂质紧密相关。SLS目前有三种生产工艺：

工艺1：SO3 /airprocess

Step 1 C12H25OH + SO3 → C12H25SO4H 

Step 2 C12H25SO4H + Na2CO3 → C12H25SO4Na + CO2 + H2O

工艺2：Oleum (H2SO4 /SO3 )process

Step 1 C12H25OH + H2SO4/SO3 → C12H25SO4H + H2O

Step 2 C12H25SO4H + Na2CO3 → C12H25SO4Na + CO2 + H2O

工艺3：Chlorosulfonicacid process

Step 1 C12H25OH + ClSO3H → C12H25SO4H + HCl

Step 2 C12H25SO4H + Na2CO3 → C12H25SO4Na + CO2 + H2O 

月桂醇来自植物，其中会含有少量的C-10、C-14和 C-16同系物，在反应中会转移到SLS中去，由于理化性质相似，这些同系物不认为是SLS的杂质。但未反应完的醇、硫酸、盐(NaCl、Na2SO4)、Na2CO3是主要的工艺杂质，这就是为什么药典标准中规定碱度、氯化钠、硫酸钠、未酯化醇含量的原因。

SLS中的杂质谱和杂质量与工艺与控制水平有关，例如工艺2中就可能有硫酸残留。对于工艺2和工艺3而言，如果能够严格控制反应条件就会有很少的硫酸残留在终产品。

批号A可能由于中和步骤不完全，而导致硫酸残留，这通过检验数据可以佐证。本品在高温条件下，SLS中残留的硫酸与碳水化合物辅料（如乳糖）发生脱水反应，导致了黑点的产生。

二、思考与建议

1、原辅料控制 

原料药生产中，起始物料、溶剂试剂、合成工艺、精制方法、生产环境、设备等都可能引入外源性杂质或黑点，包装过程中也可能引入灰尘。原料药本身如果发生降解也可能产生黑点，在研发前期就应该对文献进行检索，对化学性质进行归纳总结。在研究过程中的高温、高湿、光照等降解试验中也应注意观察颜色的变化。

辅料质量是影响产品质量的关键因素，由于生产工艺以及质量控制水平的差异，不同来源、不同批号、不同厂家的辅料都可能存在很大差异。就某一辅料而言各国药典标准往往不一致，在药品注册申报中应注意对所使用的辅料进行各国标准列表对比，分析存在的差异及原因，并结合特定产品的处方工艺制定合理的内控标准，有时候看似增加很多研究工作，但是对产品质量而言可能是一个重要保证。 

本案例说明，对于SLS而言，目前USP/EP/JP质量标准不能区分不同质量的SLS，因此应格控制SLS的生产工艺或收紧质量标准中硫酸及其他杂质的限度，这是本品研发中的一个关键点。 

2、工艺过程控制

压片机冲头的油如果落入到颗粒中可能会产生黑点，冲头与冲模磨损也可能产生斑点，这时应擦拭干净冲头、在冲头上套一个挡油圈防止油垢滴入、正确安装冲头。在生产中应关注各个工序设备是否有漏油、掉落异物、引入杂质的可能。由于物料混合不均匀、设备清洁不彻底、活性炭过滤步骤出现问题、设备各部件之间距离不合理而在旋转和挤压过程中导致摩擦、空气和水受到外界污染、人员和包装袋引入污染等都是可能引起片剂变色或出现黑点的原因。总之，在生产工程中应严格执行GMP、SOP，这样才能更好的保证产品质量。

3、稳定性考察

某些药品变色是由于其中含有的某种辅料或原料接触温度、湿度、空气引起的，如VC片剂的颜色变化，就受湿度影响很大。

白色包衣片很容易观察到变色或黑点，但某些带颜色的包衣片不易发现片芯是否变色，在进行其他指标检测检测时的研细环节中应注意观察有无颜色变化。 

由于原料降解、辅料杂质、原辅料相容性问题引起的变色或黑点问题，可结合上述例子的研究思路进行研究，如从微生物、相容性、化学分析（如采用SEM/EDS、MS等高端检测技术进行微观结构、元素、杂质定性分析）、试验佐证、辅料工艺和质量标准对比分析等方面进行研究。

变色或黑点问题是片剂外观中常见的“物理稳定性缺陷”，有时发生在表面，有时在内部，或者二者都有。尽管有些变色或黑点问题很难找到原因，因为有些原因确实非常复杂（如金属离子的直接作用，其他杂质的促进作用等），但是在药品研发、生产中一旦发现问题后，企业有关人员应主动开展调查研究，找到问题的根本原因，只有这样才能不断提高研发水平和生产质量管理水平。 

参考文献：

G. Carr, "Black Specks in Tablet Stability Samples," Pharmaceutical Technology 39 (8) 2015