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质粒保有率(质粒丢失率)的检测方法

嘉峪检测网        2019-06-10 15:10

在利用大肠杆菌表达重组蛋白时,一般需要对重组菌进行质粒保有率(有些说法是质粒丢失率)的测定,验证质粒的遗传稳定性,一般要求是质粒保有率不低于90%(不同情况下要求不同)。

 

检测原理:在培养基上加入相应的抗生素,然后利用重组菌质粒上带有的抗性基因,筛选出带质粒的大肠杆菌。

 

实验方法

 

1、稀释菌液至稀释倍数为10-6、10-7、10-8,,分别将菌液涂布到LB固体培养基上,培养17小时,37℃。

2、选择菌落数在30-300个范围的培养皿,挑选100个生长良好的菌落,分别接种到含抗生素的LB固体培养基和不含抗生素的LB培养基上,培养12小时,37℃。

3、计下各培养基上菌落数。

4、计算公式:质粒保有率=含抗生素培养基上菌落数/不含抗生物培养基上菌落数*100%

5、质粒丢失率=(不含抗生素培养基上菌落数-含抗生素培养基上菌落数)/不含抗生素培养基上菌落数*100%

 

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来源:Internet

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