稳定性指示方法是基于药品中活性成分的特征结构，将活性成分与其降解产物、副产物及其他辅料区分开来，以便能够准确测定活性成分的含量。稳定性指示方法的预期用途是监测成品中药物的稳定性，能够区分活性成分和稳定性评估期间在规定储存条件下形成的降解产物，为包材制定的合理性及药品的有效期提供一个知识性数据。此外，稳定性指示方法必须有足够的灵敏度以及专属性，以检测和量化一种或多种降解产物。常见的稳定性指示有薄层色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法、高效液相色谱法等，而滴定法、红外光谱法、原子吸收法、紫外分光光度法，虽然检测精确，但不能视为稳定性指示方法。下面就如何建立稳定性指示方法进行简单介绍（以液相方法为例）。

一、分析方法的生命周期，如下图所示：

 二、分析方法开发中需要明确以下几个关键问题：

（1）需要检测哪些数据—含量、有关物质、残留溶剂、抗氧剂含量及抑菌剂含量等关键质量属性；

（2）检测的目的是什么—工艺开发、中控、产品放行等；

（3）方法的目的是什么—定性还是定量；

（4）方法的性能要求是什么—专属性、灵敏度、准确度、精密度、耐用性等；

（5）样品的基质是什么—原料、片剂、口服溶液、注射液、辅料、强降解样品、影响因素样品等；

（6）开发的方法是否可以转移至工厂QC实验室

三、分析方法开发的基本流程如下所示：

注：质量平衡的计算根据各公司sop执行

在开始实验之前，应查阅文献和内部数据库，以确定现有方法是否适用于新的分析，以及他们是否符合当前的监管要求。通用方法、文献方法、先前的经验构成方法开发和优化的起点，药典方法适用于仿制药，但仅应被视为新药品方法开发的起点，因为这些方法仅适用于专论列出的药物。如果没有方法作为合适的起点，则应收集药物（活性成分）、相关化合物、样品基质的信息，主要包括：分子结构、官能团、是否存在手性中心；化合物的理化性质，比如最大吸收波长、LogD、LogP、pKA、药物存在形式、化合物溶解性以及稳定性。理想情况下，应根据化合物的理化性质、样品基质、可检测性、可用的仪器选择合适的分析方法。

首先，应考虑所有分析物的可检测性，包括已知和潜在的副产物、降解产物和样品干扰（如添加剂），以确保该方法具有所需的灵敏度和专属性。

液相常用的检测器包括UV、DAD、IR、ELSD、CAD、MS。UV、DAD检测器常用于有紫外吸收的化合物；IR检测器（通用检测器，灵敏度不高、不能用梯度），常用于参比制剂辅料解析、糖类等无紫外吸收样品检测；ELSD检测器（通用检测器，流动相具有挥发性）适用于无紫外吸收样品；CAD检测器（通用检测器，）同样适用于无紫外吸收样品；MS检测器价格昂贵，常用于基因毒性杂质检测。首先通过DAD检测器，确定化合物的最大吸收波长；选择低波长获得更高的灵敏度和选择高波长获得更好的基线及更高的信噪比之间需要作出取舍。

常用的流动相—水相：磷酸盐体系（截止波长＜200nm）、甲酸盐/乙酸盐体系（截止波长210nm）；有机相：乙腈（截止波长＜200nm，黏度低）、甲醇（截止波长230nm，对盐的溶解性好、便宜，但粘度大）、四氢呋喃（含过氧化物，不推荐用）；离子对试剂：四丁基溴化铵、四丁基氢氧化氨—用于阴离子样品测定（酸性化合物）；戊己庚辛磺酸钠—用于阳离子样品测定（碱性化合物）。应根据化合物的存在形式、官能团、pKA选择流动相体系，流动相（水相）PH应在其缓冲范围内，在化合物pKA±2以外（使化合物呈单一形态），特殊情况可以在化合物pKA±1以外，因为在化合物pKA附近，化合物保留时间容易漂移。流动相的pH值与离子对试剂同样密切相关，四丁基铵一般在pH7.5下运行，磺酸盐一般在pH3.5下运行。

选择合适的色谱柱（固定相）—首先通过文献或者药典（EP官网、USP官网）推荐的色谱柱且色谱柱要比较新（确保可重现）；根据化合物的性质选择—酸性（如安捷伦SB系列）、碱性（如Waters Xbridge系列），也可根据色谱柱的载碳量选择。

色谱峰的定位—一般通过DAD光谱图及对照品保留时间确定。

样品的选择及制备。选择具有代表性的样品批次（工艺确定）—制剂：破坏样品（影响因素样品）；原料：中间产品、粗品、破环样品。样品的制备是整个色谱过程的关键步骤，如果未能为正确处理，会影响色谱分析。原料药前处理需要合适的溶剂溶解稀释即可进样；注射液可以直接进样或者稀释后进样；片剂、胶囊需要将其粉碎，然后进行超生提取，然后过滤、稀释进样；软膏需要合适的溶剂溶解、萃取、蒸发、再溶解才能进样。如果样品溶解不完全或者用的溶剂极性太强，将导致色谱谱带变宽、拖尾或者形成肩峰，因此要确保样品在合适的溶剂中溶解，然后用流动相稀释，消除这个问题。

定量还是定性。对于主成分含量，一般通过外标法计算；对于杂质，一般通过外标法或者加校正因子的主成分外标法计算；对于个别基因毒性杂质，通过限度法进行定性。

方法开发完成后，进行简单的耐用性试验及准确度试验；再进行强降解试验（一般降解5%-20%），考察主峰的峰纯度（通过DAD）及质量守恒，确保方该法具体稳定性指示。